講述共聚焦顯微鏡TCS SP8的操作步驟
更新時間:2018-10-22 點擊次數:1154
共聚焦顯微鏡TCS SP8包括LED光源、旋轉多針孔盤、帶有壓電驅動器的物鏡和CCD相機。LED源通過多針孔盤(MPD)和物鏡聚焦到樣品表面上,從而反射光。反射光通過MPD的針孔減小到聚焦的部分,這落在CCD相機上。來自傳統(tǒng)光學顯微鏡的圖像包含清晰和模糊的細節(jié)。相反,在共焦圖像中,通過多針孔盤的操作濾除模糊細節(jié)(未聚焦)。只有來自焦平面的光到達CCD相機。因此,共聚焦顯微鏡能夠在納米范圍內獲得高分辨率。每個共焦圖像是通過樣品的形貌的水平切片。在不同的焦點高度捕獲圖像產生這樣的圖像的堆疊,通過共焦顯微鏡通過壓電驅動器通過物鏡的垂直位移來實現。200到400個共焦圖像通常在幾秒內被捕獲,之后軟件從共焦圖像的堆棧重建的三維高度圖像。
共聚焦顯微鏡TCS SP8的操作步驟:
1.開啟儀器電源及光源:一般先開啟顯微鏡和激光器,再啟動計算機,然后啟動操作軟件,設置熒光樣品的激發(fā)光波長,選擇相應的濾光鏡組塊。以便光電倍增管(photo multiplier tube,PMT)檢測器能得到足夠的信號結果。使用汞燈的注意事項同普通熒光顯微鏡。
2.設置相應的掃描方式:在目視模式下.調整所用物鏡放大倍數,在熒光顯微鏡下找到需要檢測的細胞。切換到掃描模式,調整雙孔針和激光強度參數,即可得到清晰的共聚焦圖像。
3.獲取圖像:選擇合適的圖像分辨率,將樣品完整掃描后,保存圖像結果即可。
4.關閉儀器:儀器測定樣品結束后,先關閉激光器部分,計算機仍可繼續(xù)進行圖像和數據處理。若要退出整個共聚焦顯微鏡TCS SP8系統(tǒng),則應該在激光器關閉后,待其冷卻至少10分鐘后再關閉計算機及總開關。
共聚焦顯微鏡TCS SP8是一項高分辨率三維光學成像技術,主要特點在于其光學分層能力,即獲得特定深度下焦點內的圖像,圖像通過逐點采集,以及之后的計算機重構而成,因此它可以重建拓撲結構復雜的物體。